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DNA分型上海亲子鉴定PCR-RFLP分型方法
分子生物学技术将HLA分型由抗原水平深入到基因水平．1991年第十一屈
国际专题研讨会讨论了HLA-Ⅱ类DNA分型方法；L996年第十二届国际会议讨
论了HLA-I类DNA分型方法。HLA-DNA分型方法都是针对核苷酸顺J芋差异
而设计的，主要有以下几种。
（一】上海亲子鉴定PCR-RFLP分型方法
早期对HLA-Ⅱ类DR、DQ抗原作DNA分型，是根据HLA-Ⅱ类抗原的核苷
酸序列中限制酶识别点分布，利用限制酶切割，再经电泳，分子杂交．自显影，完成
对Ⅱ类抗原的等位基因的分型。RFLP使用cDNA全长探针，显示出许多杂交片
段，电泳结果较难分析，操作烦琐，耗时长，难以普及。
随着PCR技术成熟和HLA复合体各等位基因核苷酸顺序的阐明t PCR-
RFLP技术相应建立。利用组间特异性引物先扩增目的DNA片段，扩增产物再
用多种限制酶消化，电泳分离获得DNA的多态性。这种方法首先要找到HLA某
一位点与HLA其他位点不同的序列，但该序列是该位点所有等位基因共有的，用
以设计组间特异性引物。然后用限制酶切割扩增产物并计算酶切片段长度。选择
用最少的酶切点，获得识别最多基因型的方案。成功的关键在引物的设计，理论上
要求等位基因反应格局的识别率应达到lOO%。
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