凝胶介质上酶区带的显现及亲子鉴定鉴定
酶蛋白的显示方法是根据酶特异性的催化特性设计的,在凝胶上原位操作。
经过显色,被分离的酶蛋白显现特征性谱带,称为酶谱。常用的有以下方法:
1.直接亲子鉴定底物显色法常用于测定水解酶,在酶的作用下,无色的底物被酶的
催化反应转变成有色产物,从而显现酶的谱带。例如:使用酚酞磷酸盐作为底物,
显现红细胞酸性磷酸酶。酚酞磷酸盐在红细胞酸性磷酸酶的作用下,水解出磷酸
与酚酞,酚酞在碱性条件下,呈淡红色,从而显现出淡红色区带。
2.荧光染色法在亲子鉴定酶的催化下,非荧光底物生成高度荧光的产物(正荧光染
色)或使荧光底物转化成非荧光产物(负荧光染色)。例如:以非荧光物质4-甲基
伞形酮醋酸盐作为底物,在酯酶D的催化下水解为羧酸阴离子和发荧光的甲基伞
形酮,在紫外线照射下能够显现出酷酶D酶谱区带。
3.电子转移染料染色法在酶的催化下,反应底物转化成新的产物的同时,
使氧化型辅酶NAD+或NADP+还原成NADH或NADPH,同时提供电子。在中
间媒介催化剂吩嗪甲酯硫酸盐( phenazine methosujfate.PMS)的参与下,染料
MTT还原成暗蓝紫色的不溶性甲腊(formazan),使酶区带显色。
2022-01-22 17:10:21
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