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上海基因档案对多个位点同时进行检测时

来源： 中国亲子鉴定基因检测中心 日期：2012-04-30 点击： 0 属于： 新闻中心

第三类是上海亲子鉴定采用甲基化CpG特异性结合蛋白(IVlethyl-CpG-binding domain protein，MeCP)，该蛋白家族包括」4eCPl和MeCP2等。以MeCP为填充物开发的MBD柱层析法常用于基因组范围内的甲基化位点扫描（Yegnasubramanian et al. , 2006; Shiraishi et al.现今文献报道的各种DNA甲基化分析方法均依赖于这三种基本原理。最遁交联试剂(Ogino et a」. ，2008)，如采用锇酸盐的化学修饰方法，这些均可能成为重亚硫酸盐法的一种理想替代方案。DNA甲基化检测方法根据检测目的不同，DNA甲基化检测方法分为两类：一类是位点特异性的，即针对某个特定CpG位点检测其甲基化状态；第二类是基因组范围内的DNA 甲基化扫描方法，用于了解基因组范围内的DNA甲基化状态或发现新的DNA 甲基化位点。已有学者对DNA甲基化检测方法做了比较全面的总结与介绍：Shames et al. ， 2007)。在此，我们从法医学的应用角度出发，结合近年来DNA甲基化检测方法新进展，简要介绍上海亲子鉴定一些具有一定上海亲子鉴定法医学应用前景的DNA 甲基化检测方法。）位点特异性的DNA甲基化检测方法位点特异性的DNA甲基化检测方法．甲基化敏感的单核苷酸引物延伸法单碱基延伸技术在SNP的检测中已得到了广泛应用。Gonzalgo和Jones (1997)首次将此技术应用于特定CpG位点甲基化状态的定量检测。甲基化敏感的单核苷酸引物延伸法(methylation-sensitive single nucleotide primer exten-sion，MS-SNuPE)的基本原理是基于重亚硫酸盐对未甲基化的胞嘧啶的化学鯈饰。模板DNA经重亚硫酸盐转化后，在特定的CpG位点将人为形成一个新的“SNP”，即[m㈡U]。针对该位点设计PCR引物和一条3'端紧邻该位点的单碱基延伸引物。常规PCR反应结束后，去除PCR引物及过量的dNTP，加入学慨终两种碱基放射性同位素或荧光强度的比值即指示了该位点的甲基化程度。由于该技术在SNP的检测中已成功开发出了类似SNPstream这样的高通量自动化检测平台，因而该技术有望在法医学检测中得到广泛应用。另有一些学者采用反相高效液相色谱技术(EI-Maarri et al. ，2002) 或基质辅助激光解离质谱分析技术(Tost et al. ， 2003) 对MS-SNuPE产物进行检测，可实现特定CpG位点甲基化程度的精确定量。由于该方法所需模板DNA量较少，有可能应用类似石蜡包埋组织等可能存在降解的上海亲子鉴定基因组DNA的检测。该方法的不利之处在于，经重亚硫酸盐转化后，PCR引物及单碱基延伸引物的设计相对复杂，尤其是在对多个位点同时进行检测时。

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