当前位置：首页 > 新闻中心

新闻中心

DNA同一认定:探针、引物及实验方案的设计原则

来源： 中国亲子鉴定基因检测中心 日期：2012-04-30 点击： 11 属于： 新闻中心

荧光PCR Eads等(2000) 将实时荧光PCR (real time PCR) 首先用于亲子鉴定特定CpG位点甲基化状态的检测，称之为MethyLight。如前所述，经重亚硫酸盐转化后，特定CpG位点依据是否甲基化形成一个人为的[mq叼多态性位点。针对该位点分别设计与甲基化和未甲基化重亚硫酸盐转化后序列结合的两条探针。在常规PCR反应中，Taq酶利用其5，一3，的外切酶活性，可将相应的DNA探针降解，释放荧光基团，产生荧光信号，依据两种荧光探针的Ct值即可换算出该位，甲基化程度。事实上，该方法已经经过诸多学者的不断改良，实际应用中，’保证实时亲子鉴定荧光PCR的特异性，在引物的3J端和探针结合区域内可能会包含多个CpG位点，这实际上是实时荧光PCR与甲基化特异性PCR两种方法的结合。

Campan等(2009)对MethyLight方法进行了全面的评价，进一步明确了其探针、引物及实验方案的设计原则，并提出了三个有效的质控系统coc)。是一个非甲基化依赖的反应系统，用以监控样品DNA的质量和完整性；QC-2 是一个非重亚硫酸盐依赖性的亲子鉴定反应系统，用以监控重亚硫酸盐转化反应的回复效率；QC-3采用非重亚硫酸盐转化依赖性的引物和重亚硫酸盐转化依赖性的探针，用以监控重亚硫酸盐的转化效率。整套系统保证了MethyLight方法对CpG甲基化检测的灵敏、准确和高效。它可以在亲子鉴定非甲基化等位基因超出10 000倍的情况下精确地检测到甲基化的等位基因并定量。此外，该方法所需模板量少，可用于石蜡包埋、激光显微切割等检材的检测。

上一篇：上海基因档案对多个位点同时进行检测时

下一篇：亲子鉴定在于保护未成年子女之利益

栏目导航