浦东新区产品与技术 DNA合成-

产品与技术 DNA合成

DNA合成方法：

目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。

亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有快速、高效的偶联以及起始反应物比较稳定的特点。亚磷酰胺三酯法是将DNA固定在固相载体上完成DNA链的合成的，合成的方向是由待合成引物的3’端向6’端合成的，相邻的核苷酸通过3’→6’磷酸二酯键连接。

步骤1：将预先连接在固相载体CPG上的活性基团被保护的核苷酸与三氯乙酸反应，脱去其6’-羟基的保护基团DMT，获得游离的6’-羟基；

步骤2：合成DNA的原料，亚磷酰胺保护核苷酸单体，与活化剂四氮唑混合，得到核苷亚磷酸活化中间体，它的3’端被活化，6’-羟基仍然被DMT保护，与溶液中游离的6’-羟基发生缩合反应。

步骤3：带帽(capping)反应，缩合反应中可能有极少数6’-羟基没有参加反应(少于2%)，用乙酸酐和1-甲基咪唑终止其后继续发生反应，这种短片段可以在纯化时分离掉。

步骤4：在氧化剂碘的作用下，亚磷酰形式转变为更稳定的磷酸三酯。

经过以上四个步骤，一个脱氧核苷酸被连接到固相载体的核苷酸上。再以三氯乙酸脱去它的6’-羟基上的保护基团DMT，重复以上步骤，直到所有要求合成的碱基被接上去。合成过程中可以观察TCA处理阶段的颜色判定合成效率。

我们的产品及服务：

我中心根据客户的不同要求，提供三种不同级别的DNA产品：

1、HPLC纯化

采用高效液相色谱纯化，产物纯度极高，且操作重复性较好，人工原因造成的误差最小，得到的引物质量最为稳定可靠。适用于各种基因工程试验，特别是：PCR克隆，定点突变，人工合成基因，荧光标记DNA、长链DNA等。

2、OPC纯化

OPC纯化是使用一种叫Cartridge的反向层析柱,根据层析柱中树脂间的亲和力作用的原理进行纯化目的DNA片段和DNA保护基(DMTr基)。OPC法适合纯化较短的引物，推荐仅用于32mer以下引物的纯化，适用于PCR用引物，DNA测序用引物，各种探针等作用。

3、PAGE纯化

PAGE纯化法是使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，对DNA片段进行分离，然后从凝胶中回收目的DNA的方法。PAGE纯化法也是一种非常有效的DNA纯化方法，对长链OligoDNA(大于50mer)的纯化特别有效。适用于基因克隆用引物，PCR用引物，DNA测序用引物，各种探针等作用。

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